【產(chǎn)品用途】：本試劑盒僅供科研使用，定量檢測細胞液、體液、組織、血清、血漿等標本中大鼠CD41分子(CD41)的含量。凡訂購我司任意一款試劑盒均享受免費代測服務(wù)，歡迎咨詢、訂購！

檢測原理：大鼠Elisa試劑盒大多采用雙抗體夾心法進行測定樣品指標水平，檢測的樣品主要是包括血清、血漿或者是各種組織液中的固體組織等，用純化的抗體微孔板，制成固體相抗體，再依次加入樣品，與所標記好的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標結(jié)合物，再加相應(yīng)的酶底物進行顏色反應(yīng)。最后用酶標儀在相應(yīng)的波長下測定該成份的吸光度，并通過標準曲線計算出樣品中的濃度。與規(guī)定的標準值比較，從而來判定樣品標本的特性。

大鼠CD41分子(CD41)ELISA試劑盒靈敏度高組成：（檢測范圍請參考說明書）

常見樣本處理及要求：

可用于ELISA實驗的樣本一般有血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法也不同。

液體樣本處理原則：所有的液體樣本，用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）

【血清樣本】：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4℃過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項：收集血液樣本應(yīng)避免溶血，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下，ELISA實驗中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng)，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準確，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。另外，樣本還應(yīng)避免細菌污染，因為細菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準確。

【血漿樣本】：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注意事項：檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。

【組織勻漿】：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織jian碎。將jian碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

大鼠CD41分子(CD41)ELISA試劑盒靈敏度高操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加稀釋液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

技術(shù)小提示：

1. 當混合或重溶蛋白溶液時，盡量避免起沫。

2. 為了避免交叉感染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽。

3.每次孵育時，請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準確性。

4. 混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色，請避光保存；假如微孔板后，將由物色變成不同深度的藍色。

5.終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后，孔內(nèi)顏色由藍變黃；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻；請充分混合。

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