一. 檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被載脂蛋白E（apo-E）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的載脂蛋白E（apo-E）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

二. 樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

三. 自備物品：

1.      酶標儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

四. 操作步驟：人載脂蛋白E(apo-E)ELISA檢測試劑盒現貨
【標準品的加樣】：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL。
【加樣】：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
【加酶】：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
【測定】：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

五. 實驗注意事項：

1.     樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染。要注意避免出現溶血

2.     本公司提供的96孔酶標板是單條可拆卸型酶標板，用戶按需求使用；剩余的酶標板請按保存條件貯存。在操作過程中避免酶標板干燥，干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。

3.     洗板不正確能夠導致不的效果。在加入底物盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔單調掉。

4.     任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的激烈氣體。任何漂白成份都會損壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

六.人載脂蛋白E(apo-E)ELISA檢測試劑盒現貨質量保證及售后服務：

一、買方嚴格按照盒子上注明的貯藏條件貯藏，因買方對產品保管不當而產生的產品質量問題由買方負責。

二、特別提示：我司出售的試劑盒均為科研試劑，嚴禁用于臨床診斷。

三、因運輸造成的貨物損壞，由賣方與運輸方協調解決，買方不承擔由此產生的損失。因不可抗力因素造成我司延期交貨或無法交貨的，我司將及時通知買方并給出解決方案。

四、試劑盒保證質量，保質期半年，請注意時效，在保質期內用完。我司提供業技術支持，如實驗有任何不明白的地方可以直接聯系我司技術人員。

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